Genetic evidence reveals improvement opportunities for tissue preparation in forensic analysis
Fecha
Autores
Romero, Rosa Elena
Sandoval, Alejandro
Arango, Juliana
Camargo, Martha Lucia
Título de la revista
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Editor
Universidad Cooperativa de Colombia / Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses
Resumen
Introduction: Paraffin embedded tissues are an excellent alternative to obtain dna, especially when it is not possible to have fresh samples or when the tissue storage and preservation is not feasible; therefore, this sample is the only item available for matching purposes. The success in any genetic analysis implies having adequate tissue fixation and suitable dna extraction methods that allow to obtain good quality and quantity molecules, free of biological, chemical and microbiological contaminants that can act as inhibitors in pcr amplification processes. Methods and Materials: In the genetics laboratory at the National Institute of Legal Medicine and Forensic Sciences, South-West Regional Office in Colombia, a preliminary test for validation of the dna extraction in paraffin embedded tissue was performed, using the validated organic method used as routine by the genetics laboratory in Bogotá, Colombia. Results and discussion: The effectiveness of the method based on the analysis of reproducibility, respectability and conformance was confirmed in terms of dna concentration, and acquisition of genetic profiles from dna extracts from four replicates of three different types of tissues obtained from a fetus, with respect to a blood sample in fta support. Conclusions: With the preliminary results obtained, some improvement opportunities were found for laboratories involved in the process.
Introducción: los tejidos embebidos en parafina constituyen una excelente alternativa para obtener adn, especialmente cuando no es posible contar con muestras frescas o el almacenamiento y conservación del tejido no es viable, de manera que esta muestra es el único elemento disponible para realizar un cotejo. El éxito en cualquier análisis genético es contar con métodos de fijación de tejidos y de extracción de adn adecuados que permitan obtener moléculas de buena calidad y cantidad, libres de contaminantes biológicos, químicos y microbiológicos que pueden actuar como inhibidores en los procesos de amplificación por pcr. Métodos y materiales: en el laboratorio de genética del Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses, Regional Suroccidente, Colombia, se realizó una prueba preliminar para la validación de la extracción de adn en tejidos embebidos en parafina, utilizando el método orgánico validado y empleado de rutina por ellaboratorio de genética de Bogotá, Colombia. Resultados y discusión: se corroboró la eficacia del método a partir del análisis de reproducibilidad, respetabilidad y concordancia en cuanto a concentración de adn, y obtención de perfiles genéticos a partir de los extractos de adn de cuatro réplicas de tres diferentes tipos de tejidos obtenidos a partir de un feto, con respecto a una muestra de sangre en soporte fta. Conclusiones: con los resultados preliminares obtenidos, se encontraron algunas oportunidades de mejora para los laboratorios que intervienen en el proceso.
Introdução: os tecidos embebidos em parafina constituem uma excelente alternativa para obter dna, especialmente quando não é possível ter amostras frescas ou a armazenagem e conservação do tecido não for viável, de forma que a amostra é o único elemento disponível para realizar uma comparação. O sucesso em qualquer análise genética é ter os métodos de fixação de tecidos e de extração de dna adequados que permitam obter moléculas de boa qualidade e quantidade, livres de contaminantes biológicos, químicos e microbiológicos que possam agir como inibidores nos processos de amplificação por pcr. Métodos e materiais: no laboratório de genética do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, Regional Sul-ocidente, Colômbia, realizou-se um teste preliminar para a validação da extração de dna em tecidos embebidos em parafina, utilizando o método orgânico validado e empregado rotineiramente pelo laboratório de genética de Bogotá, Colômbia. Resultados e discussão: foi confirmada a eficácia do método a partir da análise de reprodutibilidade, respeitabilidade e concordância em relação à concentração de dna, e obtenção de perfis genéticos a partir dos extratos de dna de quatro réplicas de três diferentes tipos de tecidos obtidos a partir de um feto, no que diz respeito a uma amostra de sangue em suporte fta. Conclusões: com os resultados preliminares obtidos, foi possível achar algumas oportunidades de melhoramento para os laboratórios que intervém no processo.
Introducción: los tejidos embebidos en parafina constituyen una excelente alternativa para obtener adn, especialmente cuando no es posible contar con muestras frescas o el almacenamiento y conservación del tejido no es viable, de manera que esta muestra es el único elemento disponible para realizar un cotejo. El éxito en cualquier análisis genético es contar con métodos de fijación de tejidos y de extracción de adn adecuados que permitan obtener moléculas de buena calidad y cantidad, libres de contaminantes biológicos, químicos y microbiológicos que pueden actuar como inhibidores en los procesos de amplificación por pcr. Métodos y materiales: en el laboratorio de genética del Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses, Regional Suroccidente, Colombia, se realizó una prueba preliminar para la validación de la extracción de adn en tejidos embebidos en parafina, utilizando el método orgánico validado y empleado de rutina por ellaboratorio de genética de Bogotá, Colombia. Resultados y discusión: se corroboró la eficacia del método a partir del análisis de reproducibilidad, respetabilidad y concordancia en cuanto a concentración de adn, y obtención de perfiles genéticos a partir de los extractos de adn de cuatro réplicas de tres diferentes tipos de tejidos obtenidos a partir de un feto, con respecto a una muestra de sangre en soporte fta. Conclusiones: con los resultados preliminares obtenidos, se encontraron algunas oportunidades de mejora para los laboratorios que intervienen en el proceso.
Introdução: os tecidos embebidos em parafina constituem uma excelente alternativa para obter dna, especialmente quando não é possível ter amostras frescas ou a armazenagem e conservação do tecido não for viável, de forma que a amostra é o único elemento disponível para realizar uma comparação. O sucesso em qualquer análise genética é ter os métodos de fixação de tecidos e de extração de dna adequados que permitam obter moléculas de boa qualidade e quantidade, livres de contaminantes biológicos, químicos e microbiológicos que possam agir como inibidores nos processos de amplificação por pcr. Métodos e materiais: no laboratório de genética do Instituto Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, Regional Sul-ocidente, Colômbia, realizou-se um teste preliminar para a validação da extração de dna em tecidos embebidos em parafina, utilizando o método orgânico validado e empregado rotineiramente pelo laboratório de genética de Bogotá, Colômbia. Resultados e discussão: foi confirmada a eficácia do método a partir da análise de reprodutibilidade, respeitabilidade e concordância em relação à concentração de dna, e obtenção de perfis genéticos a partir dos extratos de dna de quatro réplicas de três diferentes tipos de tecidos obtidos a partir de um feto, no que diz respeito a uma amostra de sangue em suporte fta. Conclusões: com os resultados preliminares obtidos, foi possível achar algumas oportunidades de melhoramento para os laboratórios que intervém no processo.
Palabras clave
DNA , degradation , extraction , histotechnology , paraffin. , ADN , degradación , extracción , histotecnología , parafina , DNA , degradação , extração , histotecnologia , parafina.