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Title: Efecto de la ciclicidad ovárica de las hembras ovinas sobre la tasa de recuperación, competencia ovocitaria y producción de embriones in vitro
Author: Triana Gelvez, Lina Marcela
Email autor: lina.trianag@campusucc.edu.co
Issue Date: 24-Mar-2021
Advisor / Validator: Moreno Jerez, Edgar Ricardo
Keywords: calidad morfológica de CCOs
Tasa clivaje
Maduración ovocitaria
Estandarización del medio de fertilización
Resume: Este proyecto se realizó con el objetivo de evaluar la influencia de la ciclicidad ovárica en hembras ovinas sobre la tasa de recuperación y competencia ovocitaria y sobre la producción in vitro de embriones. Se obtuvieron pares de ovarios hembras ovinas provenientes de una planta de beneficio ubicada en la ciudad de Bucaramanga. Primeramente, fueron clasificados de acuerdo a la presencia de cuerpo lúteo (CL) en tres grupos de la siguiente manera: NCL (No Cuerpos Lúteos) o anovulatorios, Monovulatorios y poliovulatorios. Posteriormente, para establecer la influencia directa del CL, los ovarios se estratificaron en 5 subgrupos o tratamientos de la siguiente manera: NCL, M+, M-, P+ y P-. Luego, se procedió a recuperar los ovocitos por ovario por grupo experimental, y evaluar la calidad del ovocito. Posteriormente, los ovocitos clasificados como tipo I y tipo II se sometieron a maduración in vitro (MIV). La maduración de los CCOs se realizó en incubadora durante 22-24 horas, en gotas de 100 μL de medio de maduración, cada una marcada con su grupo correspondiente, siendo recubiertas por aceite mineral (SIGMA) previamente filtrado. Una vez transcurrido el tiempo de maduración los ovocitos tipo I y tipo II fueron recuperados de los ovarios y se fertilizaron con espermatozoides de ovino durante 18-22 horas en FIV. Los posibles embriones fueron cultivados in vitro (CIV), estuvieron en cultivo durante 7 días. Se evaluó la tasa de clivaje a las 48 h del CIV y a los 8 días de cultivo se determinó la tasa de blastocistos. Se realizaron dos experimentos, el primero evaluó la tasa de Recuperación, calidad morfológica y competencia nuclear y citoplasmática de ovocitos y el segundo experimento evaluó efecto de la presencia del cuerpo lúteo, sobre la tasa de recuperación ovocitaria. Los resultados mostraron que el mayor porcentaje de ovocitos recuperados lo obtuvo el grupo P+ y M- y el menor porcentaje de ovocitos recuperados fueron los grupos NCL. En la tasa de clivaje se observó que de la misma forma el grupo que tuvo mayor porcentaje fue el P+. Se concluye que la ciclicidad ovárica causa un efecto sobre la competencia de desarrollo ovocitario, afectando también el porcentaje de clivaje y el desarrollo embrionario. Y el manejo de las células en cocultivo causan un efecto positivo sobre la producción de embriones in vitro.
Abstract: This project was carried out with the objective of evaluating the influence of ovarian cyclicity in ovine females on the recovery rate and oocyte competition and on the in vitro production of embryos. Pairs of ovine female ovaries were obtained from a processing plant located in the city of Bucaramanga. First, they were classified according to the presence of the corpus luteum (CL) into three groups as follows: NCL (No Corpus Luteum) or anovulatory, Monovulatory and poliovulatory. Subsequently, to establish the direct influence of CL, the ovaries were stratified into 5 subgroups or treatments as follows: NCL, M +, M-, P + and P-. Then, the oocytes were recovered per ovary per experimental group, and the quality of the oocyte was evaluated. Subsequently, the oocytes classified as type I and type II were subjected to in vitro maturation (IVM). The maturation of the CCOs was carried out in an incubator for 22-24 hours, in drops of 100 μL of maturation medium, each one marked with its corresponding group, being covered by mineral oil (SIGMA) previously filtered. Once the maturation time had elapsed, type I and type II oocytes were retrieved from the ovaries and fertilized with ovine sperm for 18-22 hours in IVF. The probable embryos were cultured in vitro (CIV), they were in culture for 7 days. The cleavage rate was evaluated at 48 h after VSD and at 8 days of culture, the blastocyst rate was determined. Two experiments were carried out, the first one evaluated the recovery rate, morphological quality and nuclear and cytoplasmic competence of oocytes and the second experiment evaluated the effect of the presence of the corpus luteum on the oocyte recovery rate. The results showed that the highest percentage of recovered oocytes was obtained by the P + and M- group and the lowest percentage of recovered oocytes were the NCL groups. In the cleavage rate, it was observed that, in the same way, the group with the highest percentage was the P +. It is concluded that ovarian cyclicity causes an effect on oocyte development competence, also affecting the cleavage percentage and embryonic development. And the handling of cells in coculture causes a positive effect on the production of embryos in vitro.
Table Of Contents: Resumen. -- Introducción. -- 1. Planteamiento del Problema. -- 2. Justificación. -- 3. Objetivos. -- 3.1 Objetivo General. -- 3.2 Objetivos Específicos. -- 4. Marco Teórico. -- 4.1 Etapas de la Producción in vitro de Embriones. -- 4.1.1 Maduración Ovocitaria. -- 4.1.2 Preparación Espermática. -- 4.1.3 Fertilización in vitro. -- 4.1.4 Cultivo in vitro. -- 4.2 Competencia ovocitaria. -- 4.2.1 Factores que afectan la competencia ovocitaria. -- 5. Materiales y métodos. -- 5.1 Recolección de ovarios. -- 5.2 Selección de los ovarios por tratamiento. -- 5.3 Grupos experimentales. -- 5.4 Recuperación y clasificación de los CCOs. -- 5.5 Maduración in vitro de los ovocitos. -- 5.6 Fertilización in vitro. -- 5.7 Cultivo in vitro. -- 5.8 Evaluación de la tasa de clivaje y producción de blastocistos. -- 5.9 Diseño experimental. -- 5.10 Análisis estadístico. -- 6. Resultados y Discusión. -- 6.1 Recuperación y clasificación de ovarios y complejos cúmulos ovocitos. -- 6.2 Fertilización in vitro y gradientes de PERCOLL. -- 7. Conclusiones. -- 8. Recomendaciones. -- 9. Referencias Bibliográficas.
Program: Medicina veterinaria y zootecnia
Headquarters: Bucaramanga
Type: Trabajos de grado - Pregrado
Citation: Triana Gelvez, L. M. (2021). Efecto de la ciclicidad ovárica de las hembras ovinas sobre la tasa de recuperación, competencia ovocitaria y producción de embriones in vitro. [tesis de pregrado, Universidad Cooperativa de Colombia]. Repositorio Institucional UCC. http://hdl.handle.net/20.500.12494/33708
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